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平菇菌株提纯复壮技术农学应用效果研究

添加时间:2018-05-11 19:32:45   浏览:次   作者: www.dxlwwang.com
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本文是一篇农学硕士论文,农学(农业科学)是研究与农作物生产相关领域的科学,包括作物生长发育规律及其与外界环境条件的关系、病虫害防治、土壤与营养、种植制度、遗传育种等领域。(以上内容来自百度百科)今天为大家推荐一篇农学硕士论文,供大家参考。
 
第一章绪论
 
1.1 平菇概述
1.1.1 平菇的地位及特性
平菇不是分类学上的名词,是侧耳属一些品种的总称。平菇属于真菌学分类中的担子菌亚门、伞菌目、侧耳属[1-3]。平菇是食用菌栽培的主要品种之一。据统计,到 2015 年底为止,我国栽培的平菇总产量是 590.18 万吨,占我国食用菌总栽培产量的 83.4%。到目前,已知有鲍鱼菇、榆黄蘑、凤尾菇和 4 个侧耳等 10 个种的平菇能够供人们栽培,为菇农创造经济效益。平菇的菌丝洁白、粗壮紧密、长速快,能够分泌淡黄色的色素,能够耐受高温,25℃左右恒温培养 7 天左右可长满平板或者试管斜面。成熟的平菇子实体形态多种多样,颜色各异。据统计,除了氨基酸、纤维素和蛋白质类物质以外,平菇子实体内的海藻糖、矿物质和甘露醇等营养物质的含量也比较高。陈惜燕等[4]对几种食用菌游离氨基酸的组成及含量进行比较研究,结果表明平菇的游离限制氨基酸含量最高,平菇和金针菇的营养价值最好。迟全勃等[5]对红平菇和平菇的营养价值进行了比较与分析,结果表明平菇的氨基酸总量高于红平菇,平菇的蛋白质、粗多糖、还原糖、粗脂肪、水分含量均高于红平菇,红平菇的粗纤维含量高于平菇,综合分析平菇和红平菇都是营养价值和药用价值很高的食用菌。张云侠[6]对平菇多糖的提取、鉴定及其抗氧化活性进行研究并取得一定进展。同时平菇的药用价值也不可以小觑。人们长期食用平菇不仅可以提高免疫力,还可以改善新陈代谢。同时长期食用平菇还能够降低血糖、血脂含量,对肝炎、胃炎也具有一定疗效。傅连江[7]对平菇抑制实验性高胆固醇作用进行研究,结果表明平菇对抑制胆固醇作用较好,且无明显副作用,值得临床上试用。晋永田[8]对食用平菇降血脂进行研究,结果表明平菇具有一定的降血脂作用,且对高血脂病人效果更明显,高血脂病人食用平菇后感觉眼睛明快、四肢有力、头脑清楚。
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1.2 菌种退化
 
1.2.1 菌种退化概念及表现
食用菌菌种在继代培养过程中,由于遗传性的变异而引起原品种的优良性状、典型性状部分或全部丧失的现象称为“菌种退化”。菌种退化主要表现为菌丝体的生长速度不均一,生长速度变得缓慢,菌丝的长势变弱;长相不均一,气生的菌丝变少,菌丝变干变瘪;菌落变稀变薄,菌落呈扇形或者角状,菌落出现假色素积累或者假拮抗反应;菌种的生长能力下降,形成的原基数量少,子实体变小,延迟或提前出菇,出菇的潮次不分明;严重的情况能够影响产品的产量、品质;菇的香味也发生改变。食用菌的生长环境主要包括温度、光照、水分、氧气,CO2浓度等条件,其中温度对生物代谢的影响最大,极度不适的温度环境可以使菌种的遗传特性发生改变,使菌种的优良性状丧失。在母种培养、保存、运输过程中高温、低温(零下)都容易引起食用菌菌种退化。郭丽娟等[28]进行不同环境条件对虫生广布拟盘多毛孢进行退化研究,结果表明环境条件的变化会引起菌落的局部形态发生变化,菌丝的生长速率和产孢量均受到影响,以 24h 全光照处理、PPSA1培养基培养可以保持菌株的稳定性同时还能够减缓菌株退化。潘迎捷等[29]对香菇菌种退化进行分析研究,结果表明遗传变异是引起菌种退化的本质原因,环境因子的变化影响遗传变异的表达,因此菌种退化的表现型是遗传变异和环境因子综合作用的结果。
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第二章 组织分离复壮技术应用研究
 
2.1 试验材料
2.1.1 供试菌株
供试平菇菌株名称为“CCEF99”,引自中国农业科学院农业资源与农业区划研究所。
 
2.1.2 供试培养基
PDA 综合培养基:马铃薯(去皮)200g,葡萄糖 20g,磷酸二氢钾 2g,硫酸镁 1g,VB12 片,琼脂 20g,水 1000mL,pH 自然。Difco 培养基:Difco 39g,蒸馏水 1000mL。原种培养基:98%麦粒,2%石膏。栽培种培养基:78%棉籽皮,20%麦麸,1%石灰,1%石膏,水 1:1.2~1.3,pH自然。栽培料:78%玉米芯,20%麦麸,1%石灰,1%石膏,水 1:1.2~1.3,pH 自然。PD 综合培养基:马铃薯(去皮)200g,葡萄糖 20g,磷酸二氢钾 2g,硫酸镁1g,VB12 片,水 1000mL,pH 自然。
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2.2 试验方法
 
2.2.1 组织分离法
组织分离时选菌盖圆整,没有受到病害和虫害侵染的七成熟子实体。先用 75%酒精擦拭子实体表面,对子实体进行消毒处理。然后在没有杂菌侵染的状态下,取适当大小的接种块迅速转接到培养基中培养。培养温度一般 25℃,7~10d 左右菌丝长满试管斜面,将试管标记清楚放在 4~8℃的冰箱中保存备用。
 
2.2.2 平板菌丝长速测定
先对复壮菌株进行活化处理,活化的菌丝长满平板后,用打孔器在菌丝边缘打孔(5mm),用接种钩或者镊子在没有杂菌侵染的条件下挑取一小块快迅速的转接至标准培养基平板中央,培养、观察、采用十字交叉法划线测定复壮菌株的母种菌丝生长速度并与对照菌株的长速进行比较分析。每个菌株在培养时设置 4个重复。
.........
 
第三章尖端分离复壮技术应用研究....29
3.1 试验材料......29
3.1.1 供试菌株.........29
3.1.2 供试培养基及制备.......29
3.1.3 供试试剂及配制....29
3.1.4 主要仪器设备........29
3.2 试验方法......29
3.3 结果与分析.........30
3.4 小结.......36
第四章原生质体再生复壮技术应用研究..........37
4.1 试验材料......37
4.1.1 供试菌株.........37
4.1.2 供试培养基及制备.......37
4.1.3 供试试剂及配制....37
4.1.4 主要仪器设备........37
4.2 试验方法......37
4.3 结果与分析.........39
4.4 小结.......49
第五章 讨论与结论.........50
 
4.4 小结
 
通过对 12 个复壮菌株的菌丝长速与漆酶活性进行测定研究,结果表明 12 个复壮菌株母种菌丝漆酶与栽培种菌丝漆酶活性均高于出发对照菌株,Po30、Po11号菌株母种菌丝生长最快,Po45 号菌株原种菌丝长速最快,Po35 栽培种菌丝长速最快。通过对 12 个菌株的发酵液生物产量与漆酶活性测定研究,结果表明 12 个复壮菌株发酵液生物产量与漆酶活性均显著优于出发对照菌株。Po23、Po45 其中号菌株发酵液生物产量显著高于其他复壮菌株。通过对 12 个菌株进行出菇验证研究,结果表明 12 个复壮菌株第一潮菇产量均高于出发对照菌株,综合农艺性状 Po11、Po26、Po30、Po45、Po46 号菌株表现最优。通过对 12 个复壮菌株进行真实性检测研究,结果表明 12 个复壮菌株在酯酶同工酶和 ISSR 图谱上与出发对照菌株无显著差异。
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结论
 
本试验通过组织分离技术、尖端分离技术、原生质体再生技术对平菇菌株进行了提纯复壮技术的应用效果研究,在选材上选取了生产上栽培较为广泛的“99”菌株作为试验材料,该菌株从国外引进,该平菇品种商品外观好,色泽深,耐贮运,出菇温度广,可一年四季栽培,90 年代开始在河北、辽宁、山东等地推广应用,后在全国各地广为栽培,是目前应用最为广泛、栽培量最大的品种,由于栽培的广泛也造成了生产上同物异名、同名异物现象甚为严重同时菌种退化现象的普遍发生给菇农带来巨大的经济损失,因此研究菌种的提纯复壮技术迫在眉睫。采用三种方法对平菇提纯复壮研究结果表明,通过组织分离法获得的 4 个提纯复壮菌株从漆酶活性、发酵液生物学产量、第一潮菇产量均显著高于出发对照菌株(P 0.01),有 3 个菌株菌丝生长速度显著高于对照菌株(P 0.05)。通过尖端分离获得的 3 个菌株综合考虑菌丝生长速度、漆酶活性、发酵液产量、第一潮菇产量等指标,1 号菌株和 2 号菌株表现较好。原生质体技术再生复壮技术研究中挑取再生菌株 68 个,50 个具有锁状联合,经菌丝形态初步筛选,选出了 12个优势再生菌株,进一步研究结果表明,12 个再生菌株中,菌丝长速、发酵液产量、漆酶活性、第一潮菇产量均高于对照菌株,综合分析选出 6 个性状优良菌株。对复壮菌株进行真实性检测结果表明,11 个提纯复壮菌株与对照菌株无显著差异,进一步说明通过这三种方式分离的菌株均能够保持亲本的遗传特性。综合分析三种提纯复壮方式,组织分离、尖端分离和原生质体分离技术均能获得性状优良的提纯复壮菌株,相比而言,组织分离和尖端分离技术操作简单,无需复杂技术和设备,原生质体分离技术需要一定的操作技能和设备条件,但分离菌株从菌丝长速、漆酶活性、第一潮菇产量普遍较前两种方法高,因此,原生质体分离技术可作为平菇提纯复壮的有效手段。
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参考文献(略)

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论文关键字:农学硕士论文 漆酶活性